Detección semicuantitativa de anticuerpos anti (IgG/IgM)-SARS-CoV-2 (COVID-19) mediante enzimoinmunoensayo indirecto (ELISA, del inglés enzyme-linked immunosorbent assay) en el autoanalizador TRITURUS® (Grifols).

Los análisis se realizan a partir de muestras de sangre de pacientes de COVID-19 obtenidas por venopunción de la vena antecubital del brazo. La sangre se recoge en tubos de bioquímica con gel separador y, tras 5 inversiones, se centrifugan durante 10 minutos a 2500 rpm para obtener el suero del paciente. Es recomendable un ayuno previo a la extracción de 8 horas.

Tanto las muestras de suero obtenidas por venopunción en la sala de extracciones de Lorgen como las muestras recepcionadas directamente en el laboratorio, deben almacenarse entre 2-8ºC hasta su procesamiento. Si se estima que éste tendrá lugar más allá de 4 días naturales desde la extracción de sangre, las muestras deben ser congeladas a -20ºC.

EL TIEMPO DE RESPUESTA ES DE 24 HORAS DESDE LA

EXTRACCIÓN/RECEPCIÓN DE LAS MUESTRAS

La técnica ELISA por método indirecto se puede resumir en los siguientes pasos:

 

  • Una placa ELISA se compone de 96 pocillos que contienen el antígeno, una proteína viral, fijado a su fondo.
  • El suero del paciente contine los anticuerpos específicos (IgG/IgM) contra el COVID-19. Se distribuye en los pocillos y se incuba a temperatura ambiente para que los anticuerpos reconozcan y se unan al antígeno viral.
  • Tras varios lavados se eliminan los anticuerpos no específicos y otras proteínas y se añade e incuba un anticuerpo monoclonal anti-IgG humano conjugado con peroxidasa (HRP) que reconocerá la fracción constante de las inmunoglobulinas (IgG/IgM) del paciente unidas a la placa.
  • El conjugado que no se ha unido se elimina en sucesivos lavados y se añade el sustrato para la peroxidasa, la tetrametilbencidina (TMB), que por una reacción enzimática da un color azul a la muestra.
  • Tras una última incubación, la reacción enzimática se interrumpe después de la adición de una solución de ácido sulfúrico que torna el azul en amarillo.

La intensidad del color amarillo es proporcional a la cantidad de anticuerpos anti COVID-19 presentes en el suero.

Nuestros kits para la detección de anticuerpos anti-COVID-19 son suministrados por el mismo fabricante  que el autoanalizador de enzimoinmunoensayo TRITURUS®, Grifols (Barcelona, España), y han sido desarrollados por la empresa Diesse® (Monteriggioni, Italia). Estos kits han sido validados por el Instituto Nacional para Enfermedades Infecciosas ‘Lazzaro Spallanzani’ (Centro Nacional Microbiología Italiano). Constan de certificado CE que asegura el cumplimiento de todas las disposiciones legales. Estos ensayos tienen una sensibilidad diagnóstica del 92.5% y 87.7% y una especificidad diagnóstica del 95.8% y 97.0% para Ac(IgG) y Ac(IgM), respectivamente.

Carta presentación GrigolsDC CE 91400 SARS-CoV-2 IgGDC CE 914001 SARS-CoV-2 IgM

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